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            NRPB11L NHS-瓊脂糖凝膠FF

            發布日期:2018-10-27 閱讀次數:3207

            品  名:NHS-瓊脂糖凝膠FF

            英文名:NHS Activated NUPharose Fast Flow, NHS NUPharose FF

            目錄號:NRPB11L

            規  格:1ml,10 ml,100 ml,1L,特殊規格訂制

            運  輸:2 ~ 25℃,常壓、避光

            貯  存:100%異丙醇,-20℃

            保質期:1年


            相關介紹:

            NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離介質。該產品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有載量高,非特異性吸附少,流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和的與氨基基團反應,特別適合偶聯抗體、鏈霉親和素、酶、核酸等功能性生物大分子。


            技術指標:

            外觀

            乳白色半透明凝膠狀凝膠

            基質

            4%瓊脂糖凝膠

            配體

            NHS

            配體密度

            ≥15 μmol/mL

            蛋白質載量

            ≥10 mg/ml IgG

            耐反壓

            0.3 MPa

            粒徑范圍

            60 ~ 180μm

            工作溫度

            4 ~ 40℃

            基質pH穩定性

            3 ~ 12(長時間);2 ~ 14(短時間)

            基質化學穩定性

            在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液;1 mol/L NaOH;1 mol/L乙酸(pH 4.0);6 mol/L鹽酸胍;70%乙醇。


            應用實例:

            實驗名稱:NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯抗體。

            實驗步驟:

            1. 配制抗體:取100 mg IgG加10 ml 偶聯緩沖液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, pH 8.3)溶解,留0.1 ml以便測定偶聯效率。

            2. 偶聯反應:取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF,用50 ml 1 mM HCl分三次清洗去除保存液,清洗后立即加入抗體偶聯溶液中,4℃,震蕩反應6 小時或者過夜,進行偶聯反應。

            3. 封閉:濾出反應液,用50 ml偶聯緩沖液清洗偶聯后的凝膠,然后用10 ml封閉緩沖液(0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCl, 0.5 M 乙醇胺, pH 8.3),室溫震蕩4 小時(或者過夜)封閉未偶聯的基團,封閉后用20 ml蒸餾水洗干凈即可。

            4. 檢測:偶聯前后的反應液用SDS-PAGE檢測對比偶聯效率,偶聯好的填料根據配基特性測定功能和載量。


            注意事項:

            1. 如果配基的穩定性不了解,可以選擇不同pH的緩沖液和溫度,用配基相應濃度的溶液0.5 ~ 1 ml,不加填料模擬偶聯條件,觀察溶液是否會產生沉淀。有沉淀產生對應的偶聯效果就不好,可以稍微降低pH或溫度,同時可以加5%左右的甘油或PEG保護蛋白,避免產生沉淀,總之對于任何配基最好能了解其溶解性及穩定性,避免實驗失敗導致損失。

            2. 如果偶聯的配基不穩定,可在搖床上4℃振搖偶聯1 ~ 12小時,以維持配基的活性。偶聯配基后盡快清洗填料,避免在高pH 條件中,配基失活。

            3. 更穩定的配基可以直接溶解于0.2 M碳酸氫鈉,可適當提高溫度,如室溫,偶聯時間則相應可縮短至1 ~ 2 小時。

            4. 偶聯蛋白的較適pH為7.5 ~ 9.0,在室溫或4℃均可,提高溫度能增加配基的偶聯效率,根據蛋白的穩定性選擇合適的pH 和溫度。偶聯蛋白溶液的濃度以5 ~ 15 mg/ml較佳。凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5 ~ 1:2.0較佳。

            5. 偶聯的緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液,但絕對不能使用氨基的緩沖體系,如Tris-HCl緩沖液。

            6. 封閉的緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑,如乙醇胺、Tris等,pH在8 ~ 9室溫封閉數小時可完全封閉。推薦的封閉緩沖液為0.5 M 乙醇胺,0.5 M NaCl,pH 8.3或0.1 M Tris-HCl,pH 8.5。

            7. 在偶聯中盡量使用溫和的混勻方式,如震蕩、翻轉、旋轉等。如使用磁力攪拌器或者機械攪拌,需要降低攪拌的速度,只要把填料能混勻完全懸浮起來即可,避免劇烈攪拌使凝膠微球破碎。

            8. NHS-瓊脂糖凝膠FF需現取現用,避免時間過長造成活性降低。

             導購指南


            中文名

            英文簡稱

            貨號

            規格

            產品描述

            NHS-瓊脂糖凝膠FF

            NHS Activated NUPharose FF

            NRPB11L-10

            10mL

            1*10ml

            NRPB11L-20

            20mL

            1*20ml

            NRPB11L-100

            100mL

            1*100ml

            NRPB11L-500

            500ml

            1*500ml

            注:紐龍生物填料體積為實際瓊脂糖凝膠體積


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